注意事项
１、选用活跃生长期菌种染色 ， 老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性 。
２、涂片不宜过厚 ， 以免脱色不完全造成假阳性 。
３、脱色是革兰氏染色是否成功的关键 ， 脱色不够造成假阳性 ， 脱色过度造成假阴性 。
实验流程
１、取载玻片用纱布擦干 ， 载玻片的一面用马克笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置） 。涂菌的部位在火焰上烤一下 ， 除去油脂 。
２、涂片
液体培养基：左手持菌液试管 ， 在酒精灯火焰附近５厘米左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌 ， 等冷却后从试管中沾取菌液一环 ， 在洁净无脂的载玻片上涂直径２毫米左右的涂膜 ， 最后将接种环在火焰上烧灼灭菌 。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水 ， 再用接种环取少量菌体 ， 涂在载玻片上 ， 使其薄而均匀 。
３、晾干：让涂片在空气中自然干燥 。
４、固定：让菌膜朝上 ， 通过火焰２－３次固定（以不烫手为宜） 。
５、染色：将固定过的涂片放报纸上 ， 滴加草酸铵结晶紫液 ， 染１分钟 。
６、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液 ， 用吸水纸吸干 。简单染色结束可观察细胞形态 。
【革兰氏染色的注意事项】７、媒染：滴加１滴碘液 ， 染１分钟 ， 水洗 。
８、脱色：吸去残留水 ， 连续滴加９５％乙醇脱色２０－３０秒至流出液无紫色 ， 立即水洗 。
９、复染：滴加蕃红复染３－５分钟 ， 水洗 。至此 ， 革兰氏染色结束 。
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